Пцр качественный на вич. Через какое время после заражения вич покажет анализ крови, сроки, результаты, виды анализов

Опасное заболевание, которое вполне заслуженно называют «чумой двадцать первого века». Именно поэтому на борьбу с данным недугом тратятся огромные средства и ресурсы, как и на его исследование. Дело в том, что вирус иммунодефицита еще не до конца изучен. Новые открытия позволяют ученым разрабатывать вакцины и лекарственные средства для борьбы с ним. В современной медицине большое внимание уделяется и методам диагностики данного заболевания. Одним из наиболее эффективных способов выявления вируса врачи во всем мире признают ПЦР. На ВИЧ этот метод проводится посредством исследования ДНК. Что собой представляет данное исследование, какова его достоверность и как подготовиться к сдаче анализа?

Что представляет собой анализ на ВИЧ - ПЦР?

В первую очередь следует расшифровать данную аббревиатуру. Полимеразная цепная реакция (метод ПЦР на ВИЧ) - это диагностика, которая не нашла широко применения в бесплатной медицине в нашей стране. Причин тому несколько. Но основная заключается в том, что подобное исследование стоит недешево. При этом эффективность его составляет примерно восемьдесят процентов, когда у иммуноферментного анализа и иммунного блоттинга достоверность выше. Она составляет от девяноста пяти до девяноста восьми процентов. Естественно, выявить ВИЧ методом ПЦР можно. Он также используется и в других целях. С помощью исследования ДНК и РНК определяют генетические и наследственные заболевания, а также инфекционные и вирусные недуги.

Что представляет собой ПЦР на ВИЧ, достоверность которого, как уже было сказано выше, составляет всего восемьдесят процентов, и почему этот диагностический метод получил такое название? Для исследования такого типа используется несколько видов биологического материала. Это в первую очередь кровь, если речь идет о вирусе иммунодефицита. Также для забора анализа на ВИЧ методом ПЦР используются выделения из половых женских органов и сперма. Слюна в этом случае не исследуется. Поскольку это малоэффективно. В слюне содержится незначительное количество клеток вируса. То же самое можно сказать о моче, поте и слезной жидкости.

ВИЧ - ПЦР выявляет антиген или нет? Этот вопрос нередко задают специалистам в области медицины. Ответ на него не может быть положительным. Поскольку данный метод диагностики направлен на исследование именно ДНК и РНК. Качественный ПЦР на ВИЧ производится в определенной последовательности. У предполагаемого инфицированного производят забор необходимого биологического материала. Чаще всего для подобного исследования берут венозную кровь. Кстати, пациенту перед этим не рекомендуют употреблять жирную пищу в течение нескольких суток. Исследование производится натощак. Биологический материал помещают в специальный лабораторный реактор, где производят его расщепление. Далее к биологическому материалу добавляют определенные ферменты (для каждого заболевания или для каждой патологии они разные).Для того чтобы синтезировать копию микроба, вируса или инфекции, с их ДНК связываются данные ферменты.

Происходит это в несколько этапов по принципу цепной реакции. Сначала из одной молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты получается две, зачем четыре и так далее. По завершению нескольких циклов исследования лаборант получает сотни или тысячи копий ДНК исследуемого материала, благодаря чему с легкостью может сравнить их с ДНК любых патогенных организмов, инфекций и патологий на генетическом уровне, в том числе и вируса иммунодефицита. Благодаря такому исследованию больные могут сдать ПЦР на ВИЧ первого или второго типа. С его помощью также удается определить концентрацию клеток вируса в крови человека. Если ПЦР на ВИЧ положительный, но ему не предшествовал иммунный блоттинг или ИФА скрининг, то пациента направляют на данные типы исследований. Если же полимеразной цепной реакции предшествовал один из вышеперечисленных видов исследования, то сомнений у специалистов в области медицины не остается. В этом случае человеку ставят конкретный диагноз. Если же ПЦР на ВИЧ отрицательный, но у врачей остаются сомнения, то больного также могут направить на дополнительные исследования. Стоит отметить, что ложноположительный результат в случае с данным методом диагностики выявляется чаще, чем ложноотрицательный. Важно знать, что ПЦР методом мазка или соскоба на ВИЧ не производится.

Где сдать анализ крови ПЦР на ВИЧ, и можно ли сделать это бесплатно?

Как уже говорилось выше, исследование данного типа не слишком распространено в России. И причиной тому является его дороговизна. Это позволяет сделать вывод о том, что сдать анализ ПЦР на ВИЧ (достоверность ПЦР на ВИЧ 2 типа и 1 типа одинакова) в обычной государственной поликлинике нельзя. Для этого придется обратиться в специализированную лабораторию или в платную клинику. В крупных городах существуют специализированные СПИД центры, где анализы ПЦР производятся на коммерческой основе. В населенных пунктах поменьше возможность, пройти исследование такого типа есть не у всех, однако жители таких мест всегда могут посетить большие города, чтобы уделить внимание собственному здоровью.

Через сколько сдавать ПЦР на ВИЧ после предполагаемого заражения?

О том, через сколько можно сдать ПЦР на ВИЧ, нередко спрашивают у специалистов в области медицины. В этом случае никакой разницы между исследованиями нет. И полимеразная цепная реакция, и ИФА тест с иммунным блоттингом следует проводить не ранее чем через три - четыре недели после предполагаемого инфицирования. Раньше этого срока исследование производить не имеет смысла. ВИЧ через 10 дней ПЦР не выявит.

В некоторых случаях обнаружить инфекцию удается раньше или позже указанного срока. Но зависит это от конкретных особенностей организма исследуемого. Важно знать, что с помощью полимеразной цепной реакции можно обнаружить не только инфицированных, но и носителей вируса. Сроки ПЦР на ВИЧ зависят во многом от лаборатории, в которой производится диагностика. В среднем они составляют не более суток. Но существует и экспресс-исследование, которое необходимо при переливании крови или в экстренной медицине.

Роль ПЦР диагностики ВИЧ-инфекции в неонатологии

ПЦР-тест на ВИЧ используется в неонатологии в том случае, когда у инфицированных женщин появляются дети. Всем известно, что в этом случае крайне велик риск передачи вируса от матери ребенку. У всех новорожденных, матери которых являются зараженными или носителями вируса иммунодефицита, в момент появления на свет в крови уже присутствуют антитела к вирусу иммунодефицита, вне зависимости от того, произошло инфицирование или нет. С помощью ПЦР диагностики на ВИЧ удается выявить, являются они так называемой защитой иммунной системы или следствием инфицирования. В первые дни жизни младенцев исследование такого типа не производится. Ведь если инфицирование происходит во время появления на свет через родовые пути, то сразу же проведенный анализ не сможет выявить заболевания. Он покажет его лишь в том случае, если инфицирование было внутриутробным. Точность ПЦР на ВИЧ у новорожденных детей также составляет приблизительно восемьдесят процентов.

Одним из наиболее точных и достоверных методов молекулярно — генетической диагностики считается ПЦР, то есть полимеразная цепная реакция. Такой метод позволяет диагностировать у пациента различные виды заболеваний наследственного и инфекционного характера.

ПЦР — исследование позволяет диагностировать одно из таких сложных заболеваний, как , которое трудно поддается лечения. Достоверность ПЦР на ВИЧ оправдывает себя лишь в 80 случаях из 100.

Основным способов диагностики ВИЧ-инфекции в организме человека считается его крови, то есть проводиться тестирование на это заболевание. Самым простым и привычным способом диагностики является взятие венозной крови и проведение ее в специальной лаборатории. Конечно, полученный положительный результат может быть ложным, поэтому проводится его перепроверка более точным исследовательским способом в референц -лаборатории.

Полимеразная цепная реакция на считается довольно дорогостоящей процедурой, и ее проведение требует наличия специального оборудования и высококвалифицированных специалистов. Именно по этой причине она не получила широкого распространения среди населения.

Применение ПЦР-анализа для диагностики ВИЧ позволяет получить точный и достоверный результат о наличии заболевания, однако, часто это зависит от подготовки самого пациента.

ПЦР-анализ проводиться в следующих случаях:

1. Диагностирование ВИЧ-инфекции у новорожденных детей, которые появились на свет от матери, зараженной СПИДОМ.
2. С целью контроля концентрации ВИЧ в крови пациента
3. Ссследование крови донора.

Даже в том случае, если ПЦР-исследование покажет положительный результат, то диагноз только по такому тесту не ставится. Чаще всего его используют в качестве дополнительного метода для разрешения спорных ситуаций.

ПЦР-анализ, к сожалению, нельзя назвать универсальным методом , проведение которого дает точные результаты на наличие либо отсутствие инфекции в организме человека. Это связано с тем, что именно такой вид исследования чаще других методов дает ложноположительные результаты. К такому методу диагностики прибегают при постановке диагноза заболевания либо при проведении на ВИЧ-инфекцию. Преимущественно его используют как вспомогательный метод диагностирования вируса СПИДа.

Однако, несмотря на вероятность ложноположительного результата, такое исследование на ВИЧ имеет ряд преимуществ перед другими методами диагностики. Проводить ПЦР–анализ можно уже на 11-15 день после даты предполагаемого заражения, а все остальные методы позволяют оценить наличие вируса СПИДа в организме человека лишь через длительный промежуток времени. Такая разбежка объясняется тем, что большинство скрининг тестов на ВИЧ основываются на определении к вирусу, образование которых происходит в течение трех месяцев.

Главным отличием ПЦР-исследования от остальных методов диагностики считается тот факт, что он выявляет не к вирусу, а наличие самого вируса в организме пациента.

Именно по этой причине метод полимерную цепную реакцию можно назвать идеальной в том случае, если имеется необходимость проведения преждевременного выявления . Кроме этого, прибегнуть к проведению такого метода можно в том случае, когда наличие антител не может являться достоверным показателем.

Больше информации о исследованиях на ВИЧ можно узнать из видео.

При необходимости выявления степени либо тяжести патологии в организме человека прибегают к проведению ПЦР-исследования количественным способом. Именно он позволяет получить информацию об уровне концентрации инфекции в организме больного. Прогрессирование болезни сопровождается постепенным увеличением концентрации вируса и количественная ПЦР-диагностика позволяет определить стадию инфекции и эффективность проводимого . Диагностирование «вирусной нагрузки» до выявления болезни и после проведения лечения позволяет сделать заключение о том, насколько эффективно проводиться лечение.

Другие методы диагностики на ВИЧ

На сегодняшний день диагностика ВИЧ-инфекции является стандартной процедурой, которая предполагает применение различных видов диагностики:

ИФА тест-системы

Проведение такого скринингового теста позволяет выявить вирус уже через несколько недель после его проникновения в организм человека. Такое исследование направлено не на определение присутствия вируса у пациента, а на диагностировании выработки антител к нему. Выделяется несколько поколений ИФА-тестов, каждая из которых имеет разную чувствительность. Такой тест иногда дает результаты, что объясняется неправильным проведением обработки и наличием в организме пациента различных видов патологий.

Иммунный блоттинг

В том случае, если иммунный блоттинг показывает положительный результат, то можно говорить о постановке окончательного диагноза ВИЧ. Основным способом его проведения является использование нироцеллюлозной полоски, на которую нанесены белки вирусного происхождения.

Экспресс-методы

Такой считается новинкой в области диагностирования ВИЧ-инфекции и оценивать результат можно уже через несколько минут после их проведения. Наиболее точные и достоверные результаты дают иммунохроматографичесие тесты, применение которых основывается на принципе капиллярного тока.

Говорить о наличии в организме ВИЧ–инфекции можно только после подтверждения тестов ИФА анализом ИБ.

Диагностирование ВИЧ-инфекции в организме человека вносит существенные изменения в его привычный образ жизни и отношения с окружающими. Обязанностью медицинского персонала является сохранение результатов анализов, и только сам пациент принимает решение о том, кому сообщить о своем заболевании. ПЦР — является одним из диагностических методов, позволяющих выявить присутствие вируса в организме человека всего за несколько недель.

Почему так страшен ВИЧ и СПИД, какие существуют методы диагностики. Углубленная информация про ПЦР-исследования.

По статистике, предоставленной Всемирной организацией здоровья совместно с организацией ООН ЮНЭЙДС, за последние сорок лет более 25 миллионов пациентов скончались от заболеваний ВИЧ и СПИД. Не зря эпидемиологи окрестили ВИЧ чумой 20-го века, так как урон, нанесенный этой инфекцией человечеству, имеет колоссальные масштабы. Наиболее сильно заражению подверглись страны африканского континента. Заражение сильно бьет по экономике и без того нестабильных государств, народ нищенствует.

При появившейся симптоматике чрезвычайно важна оперативная диагностика заражения организма ВИЧ-инфекцией, потому как вовремя пройденный курс терапии способен спасти или хотя бы увеличить срок жизни пациента. В нынешнее время технологический прогресс шагнул далеко: изобретены новейшие способы диагностики вируса ВИЧ и СПИДа, лечение доступно для любого человека планеты, достоверность анализов характеризуется малой долей погрешности, а терапия большим процентов эффективности.

Диагностика инфекции ВИЧ

В нашей стране выявление присутствия в организме пациента ВИЧ-инфекции представляет собой комплекс анализов:

• Иммуноферментный анализ
• Иммунный блоттинг
• Полимеразная цепная реакция
• Экспресс-тесты

Иммунофермнтный анализ.

Скрининг (тест ИФА) является первоначальной стадией определения заражения в организме. Он базируется на образованных в искусственных условиях белковых соединениях вируса, которые идентифицируют продуцируещиея иммунными клетками антитела как реакцию на заражение. Происходит химическая реакция между реактивами, вследствие чего индикаторный элемент меняет цвет. Значит, результат теста положительный. Информацию по такому способу можно получить через пару недель с момента инфицирования. Таковой способ выявляет не присутствие инфекции у пациента, а определяет вырабатывающиеся к этой инфекции антитела. Бывает, продуцирование антител стартует через 10-15 дней с момента инфицирования, но в подавляющем большинстве случаев позднее – через 1-1,5 месяца.

Информация по такому анализу обрабатывается от двух до десяти дней.

Достоверность диангоза на ВИЧ подкрепляется анализом ИБ. Исключительно положительный тест ИБ на вирус может служить веской причиной для утверждения инфицирования.

Суть анализа:

В лаборатории берут пробу венозной крови на анализ. Пробу дополнительно подготавливают, белковые соединения, которые в ней присутствуют, электризуются в испытательной камере, далее их распределяют в гелевой субстанции соответственно молекулярной массе. Бумажную полосу с напылением реактива несколько раз помещают в подготовленную пробу. При наличии в пробе антител к вирусу происходит химическая реакция и на тестовой полосе становятся видны черточки. Когда появляются 2 или 3 черточки p24, gp41, и gp120 или gp160, результат теста положительный.

При получении положительного результата по анализу ИБ с погрешностью в один процент можно сделать заключение о наличии инфекции ВИЧ в организме.

Экспресс-тесты на ВИЧ и СПИД

Новейшими технологиями для определения вируса иммунодефицита в организме являются экспресс-методы . Информацию по такому анализу можно получить через несколько минут после проведения. Наиболее высокая достоверность у иммунохромаграфических тестов – специальных тест-полос, на поверхности которых напыляется слой реагента. Антитела, содержащиеся в испытуемом материале, контактирует с реагентом, изменяя окраску индикатора. Через несколько минут проявляются две полоски, что указывает на наличие инфекции. Наличие единственной полосы означает отсутствие инфекции.

Такой тест можно использовать как дополнительный, информация по такому тесту обязательно подтверждается другими исследованиями.

Сколько стоит экспресс-тест на ВИЧ?

Экспресс-тест на ВИЧ в среднем обойдется в 200-1000 рублей.

ПЦР на ВИЧ – один из самых информативных методов молекулярно-генетического диагностирования. Этот способ помогает выявить у пациента разного рода инфекционные недуги и заболевания, которые передаются по наследству. Этот же метод диагностики применим в случае проверки биоматериала на присутствие ВИЧ – тяжелого заболевания, развивающегося на протяжении всей жизни пациента. С медицинской помощью ПЦР оказалась в числе рекомендуемых анализов, проводимых на платной основе при подозрении на вирус иммунодефицита человека. Однако достоверность исследования оправдывает себя только в 80 из 100 случаев.

ПЦР диагностика на ВИЧ расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Для исследования данного вида применяются различные типы биологических материалов. Среди них кровь, кроме этого может использоваться секреция из влагалища пациентки или семенная жидкость у мужчин.

Внимание! Слюна для ПЦР при диагностике ВИЧ не используется. Подобный подход признан неэффективным, поскольку в этом материале антитела к ВИЧ находятся в минимальной концентрации. Это же касается мочи, пота и слез.

Показанием к проведению описываемого исследования, является дважды положительный ИФА (иммуноферментный анализ). Об альтернативных назначениях речь пойдет позже.

Подробно о сути анализа

В основе анализа на ВИЧ методом ПЦР лежит возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться. Живые клетки состоят из белка и этих самых кислот, иначе говоря, из РНК и ДНК. Молекулы выступают в роли хранителей генетического кода.
При низкой концентрации вирусных частиц (ВИЧ) в биоматериале, проба включает не целые цепочки ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), а только их составляющие, называемые нуклеотидами. Анализ позволяет выявить даже незначительные остатки клеток вируса. Именно этим фактом объясняется способность ПЦР демонстрировать результат на ранних сроках – спустя несколько недель после заражения ВИЧ.

Наиболее качественных результатов от проведения полимеразной цепной реакции стоит ждать при исследовании венозной крови. Пробу расщепляют с помощью оборудования. Затем фракции подвергаются ферментной обработке. Реактивные вещества, объединившись с частицами вирусной ДНК, дублируют ее. Число таких элементов возрастает по принципу цепочки, пока их наличие (не антител) в крови пациента не станет заметно лаборантам. По точно такому же принципу не работает ни один из существующих способов диагностики.

Компоненты реакции

С помощью метода ПЦР можно заблаговременно узнать о развитии вируса в организме. Почему же его нельзя назвать популярным в области бесплатной медицины и делать повсеместно? Дело в том, что такой тест на ВИЧ весьма затратный и требует наличия следующих компонентов:

• матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты, включающая отрезок ДНК, предназначенный для амплификации;
• два праймера (для каждого цепного отрезка);
• химически активный компонент полимераза для ускорения полимеризации вирусных частиц;
• дезоксирибонуклеозидтрифосфаты;
• частицы двухвалентного магния (заряженные);
• специальный раствор для создания благоприятных условий, обеспечивающий должный уровень кислотности, солевой концентрации, количества частиц магния в жидкости.

Внимание! Чтобы защитить образец от перегрева, в материал добавляют небольшое количество вазелина, который содержит жиры и, соответственно, высокую температуру кипения.

Относительно высокий показатель точности анализа объясняется его повышенной чувствительностью, которая стимулирует реакцию на антитела к прочим вирусам.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Для объективной оценки метода в таблице ниже приведем ряд преимуществ и недостатков исследования:

Очевидно, преимуществ методики больше. Если оценивать тип диагностики с точки зрения продуктивности дальнейшего лечения и возможности продления жизни пациенту, ПЦР – самый верный путь к успеху.

Особенности анализа

Основная особенность описываемого анализа состоит в его способности к ранней диагностики ВИЧ, на что не способны другие методы исследований. Через сколько дней после предполагаемого инфицирования можно сдавать кровь на ПЦР? Обычно этот временной промежуток составляет 10-14 дней. В течение следующих 24 часов пациент получает результат. Возможные отклонения в сроках объясняются индивидуальными условиями работы диагностических центров, клиник.

Назначение исследования

ПЦР в большинстве своем проводится в целях выявления ВИЧ (синдрома иммунодефицита человека). Однако анализ можно сдать и при подозрении на развитие заболеваний, которые передаются половым путем. Этот же метод применим и в случае диагностики наследственных болезней.

ПДР-диагностика: причины для проведения

Когда следует сдавать кровь на ПЦР? Биологический материал в большинстве случаев сдается, когда вирус иммунодефицита человека приспособился к условиям организма, простимулировал выработку антител и вызвал первые симптомы ВИЧ. Однако подобное оправдано лишь в случае истечения достаточного количества времени после заражения и предполагает проведение ИФА.

Необходимость же в ПЦР возникает по инициативе пациента, который желает оперативно диагностировать заболевание (если таковое имеет место быть). Причиной тому может быть: незащищенный половой акт, контакт с биологическим материалом инфицированного, недавнее переливание крови и пр.

Кому назначается ПЦР?

Определение инфекции ВИЧ при помощи ПЦР по рекомендации специалиста производят в следующих случаях:

• предварительное диагностирование. ПЦР безошибочно подтверждает или опровергает результат ИФА;
• иммуноблоттинг подтвердил диагноз . Иммунный блоттинг является дополнительным способом исследования СПИДа. Оба метода применяются совместно, что позволяет исключить вероятность постановки ошибочного диагноза;
• при подтвержденном ВИЧ-статусе с помощью ПЦР отслеживают эффект от проведения выбранного лечения;
• для анализа крови доноров на присутствие ВИЧ-антител;
• для определения ВИЧ-статуса у новорожденного, когда мать имеет положительный результат. ПЦР в первые дни жизни позволяет определить внутриутробное инфицирование или заражение младенца при прохождении по родовым путям. Тест проводится на 2 – 3 неделе после рождения.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где его можно сдать?

Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в специальной лаборатории. Сам тест и трактовка результата не требует много времени: месяца и даже недели. Для взятия крови необходимо до 6 минут. В обычном случае специалисту, чтобы поставить диагноз и выдать заключение, потребуется не больше суток. Первые 8 часов происходит изучение крови, оставшееся время уходит на оформление. Результат можно будет забрать уже на следующий день после взятия пробы. Срок проведения экспресс-тестирования – 2 часа.

Внимание! Полис ОМС дает возможность прохождения теста бесплатно в государственном учреждении здравоохранения.

Почти любая коммерческая лаборатория способна провести исследование, причем, на анонимной основе. Человеку присваивают специальный номер, к которому затем привязывают результаты. Данная информация заливается на сайт учреждения в личный кабинет пользователя.

Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Данный способ проведения исследований является достаточно дорогим. Связано это с тем, что проводить ПЦР необходимо на новейшем медицинском аппарате, манипуляция требует от специалистов достаточного багажа знаний.

Насущный вопрос: сколько же стоит человеку сдать анализ ПЦР на ВИЧ? Для этого потребуется в районе 56-60 долларов.

Проведение анализа

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ предусматривает:

• забор крови на проведение исследование;
• дополнительный забор спермы у мужчины и половых выделений у женщины.

Внимание! В результате тест позволяет медикам определить высокую вирусную нагрузку для того, чтобы осуществлять контроль над состоянием больного.

Прочие особенности проведения этого анализа на ВИЧ, которые стоит принять во внимание:

• пару дней до теста пациенту следует снизить количество жирной пищи в рационе;
• забор крови производится на голодный желудок;
• к расщепленным биологическим материалам в особом реакторе добавляются ферменты, синтезирующие различные инфекции;
• анализ проводят в несколько этапов, т. к. деление молекул происходит в арифметической прогрессии. Специальная программа осуществляет сравнение большого количества клеточных структур для выявления ВИЧ.

Методы точной диагностики, к которым относится ПЦР, отличаются высокой стоимостью, но способны на ранних сроках выявить ВИЧ. В лечении подобных патологий самое главное – правильно и своевременно поставленный диагноз, который может улучшить качество жизни человека и ее продолжительность.

Методика ПЦР-диагностирования первоначально была разработана 35 лет назад американским ученым Кари Муллисом. Изобретатель исследования получил международную Нобелевскую награду в 1993 году за свое новаторство. Оно стало незаменимым для любой лабораторной деятельности.

ПЦР используется в молекулярной биологии, чтобы произвести множество копий (амплифицировать) небольших участков ДНК. ДНК-полимераза может добавлять нуклеотид только в существовавшую ранее 3-OH-группу. Поэтому ему нужен праймер, к которому он может добавить первый нуклеотид. Это требование позволяет определить конкретный участок последовательности шаблонов, который необходимо диагностировать. В конце реакции ПЦР конкретная последовательность будет накапливаться в миллиардах копий (ампликонов).

ПЦР включает в себя процесс нагрева и охлаждения, называемый термическим циклом, который выполняется специализированной техникой. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является относительно простой методикой. Она усиливает ДНК-матрицу для получения специфических фрагментов ДНК in vitro (анализ в пробирке). Традиционные методы клонирования последовательности ДНК в векторе и ее репликации в живой клетке часто требуют проведения исследований от нескольких дней до нескольких недель работы. Но получить результаты амплификации последовательностей ДНК с помощью ПЦР можно спустя пару часов.

Большинство биохимических анализов, используемых в диагностике инфекционных заболеваний, требуют достаточно большого количества биологического материала. Для ПЦР данное условие не является обязательным. Таким образом, ПЦР может обеспечить более чувствительное обнаружение патогена. И более высокие уровни амплификации определенных последовательностей за меньшее время с достаточно ограниченным количеством биоматериала. Эти особенности делают технику чрезвычайно полезной. Не только в фундаментальных исследованиях, но и в личных целях. Включая тестирование генетической идентичности, судебную экспертизу, промышленный контроль качества.

Основная ценность анализа заключается в возможности выявления патологий, передаваемых половым путем, до развития первых признаков. К анализу методом ПЦР прибегают при необходимости ранней диагностики ВИЧ-инфекции. А также определения РНК вируса в крови донора. Благодаря высокой чувствительности анализа получить ответ можно спустя 7-14 дней после предполагаемого инфицирования. Достоверность диагностики будет достигать от 85 до 98%. Однако, тест ПЦР назначается не всем. Поскольку является достаточно дорогостоящим исследованием. Главное, требует наличия дорогого оборудования и определенных профессиональных навыков от сотрудников лаборатории. Если пациент ранее не находился в ситуациях, связанных с повышенным риском заражения, проведение полимеразной реакции не целесообразно.

Полимеразная реакция качественного типа на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ позволяет определить присутствие в организме вирусного заболевания. Пациент может получить результат в виде следующих отметок: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но исследование не дает возможности определить количество копий ретровируса. Качественный анализ не проводится пациентам, у которых ранее была диагностирования инфекция. Не назначается в качестве контроля над эффективностью противовирусной терапии.

ПЦР количественного типа на ВИЧ

Проводится с целью определения копий РНК вируса в биологическом материале пациента. Количественный ПЦР назначается только больным с ранее выявленной инфекцией, как мониторинг проводимого лечения.

ПЦР в реальном времени

Используется в лабораторной диагностике для образования копий участков ДНК. Также для одновременного количественного исследования и детекции последовательности ДНК в биоматериале. По сути, диагностика представляет собой количественный ПЦР.

На заметку!

В различных лабораториях можно встретить несколько формулировок диагностики: «ПЦР количественное определение» и «ПЦР в режиме Real-time».

Оба анализа являются идентичными.

Взятие материала для диагностики ВИЧ

Забор биологического материала для проведения диагностики ВИЧ с помощью ПЦР проводится согласно определенным стандартам. Манипуляция проводится в процедурном кабинете. Используются одноразовые стерильные инструменты. Вскрытие пакета с инструментами проводится непосредственно возле пациента. Собранный материал помещается в стерильные пробирки, предварительно обработанные CrO3 (хромовая смесь). В качестве биологического материала выступает венозная кровь, которая сдается в утреннее время и на голодный желудок. За несколько дней до сдачи анализа следует исключить употребление алкоголя, жирной и острой пищи, прекратить прием медикаментозных препаратов.

Если отменить лекарственные средства невозможно, об этом следует сообщить до проведения анализа.

Дополнительно может быть взят мазок из уретры и влагалища, для выявления сопутствующих заболеваний, передающихся половым путем. Исследование проводится анонимно, результаты пациент получает лично в руки. При себе рекомендуется иметь удостоверение личности.

Через сколько времени можно сдавать ПЦР на ВИЧ

Выявить наличие ВИЧ-вируса возможно спустя 4-6 дней после инфицирования. В данном случае информативность анализа будет достигать 85%. Спустя 10-13 дней анализ может определить заболевание с точностью до 98%. Отрицательный результат будет верен только при условии его сдачи не ранее, чем спустя 2 недели после предполагаемого заражения.

Причины ложноположительного результата

Получить ложноположительный результат достаточно сложно.

Такое возможно при несоблюдении правил забора биологического материала, неправильной маркировки пробирки, использования некачественной тест-системы и других подобных факторов. В остальных случаях шанс получения подобного результата составляет не более 2%.

Через сколько времени можно получить результаты анализа?

Если смотреть с технической стороны, результаты ПЦР можно получить в течение 4 часов. Однако на практике пациент лабораторное заключение получает от одного до нескольких дней. В целом, сроки проведения зависят от загруженности лаборатории и от того, насколько организованно построена ее работа.

Проведение полимеразной реакции у новорожденного

ПЦР назначается в случае, когда ребенок рожден от ВИЧ-положительной матери. Проведение ИФА в данном случае не информативно. Поскольку у ребенка примерно до 2 лет сохраняются антитела против ретровируса. По этой причине иммуноферментное исследование не даст точного ответа. При проведении ПЦР у ребенка возрастом 4-6 недель и получении положительного результата речь будет идти о заражении.

Если ПЦР, проведенный в возрасте от 8 недель до полугода, показывает отрицательные результаты (при условии, что ребенок не питался грудным молоком матери) инфицирование исключается.

Почему для определения ВИЧ ПЦР лучше ИФА?

Полимеразная реакция позволяет выявить РНК вируса, его наличие в организме, в том числе количественное. Задача ИФА заключается в определении антител к ВИЧ-инфекции. Иммуноферментный анализ относительно определения возможного инфицирования не уступает ПЦР, его точность достигает 99%. Однако, в отличии от ПЦР - не способен определить заболевание на ранних стадиях его развития.

Преимущества проведения ПЦР на ВИЧ

• Полимеразная реакция непосредственно определяет наличие инфекционного агента. К примеру, ИФА может выявить исключительно антитела и продукты жизнедеятельности микроорганизма.
• Анализ четко идентифицирует конкретный патогенный микроорганизм, даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых.
• Методика позволяет исследовать любой вид биологического материала, в том числе засохшие капли крови.

Из недостатков ПЦР можно выделить повышенную чувствительность анализа. Это иногда становится причиной получения ложноположительного результата. Такое происходит в случае присутствия в пробирке или на инструментах хотя бы незначительного количества постороннего ДНК.

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР и ИФА: расшифровка, достоверность результатов

Иммуноферментный анализ, при котором результаты тестирования указывают на отсутствие в организме антител к ВИЧ и антигена р24, является отрицательным. В случае наличия данных молекул - выдается положительное диагностическое заключение. В ряде случаев пациент может получить ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подобное является следствием раннего срока беременности, наличия герпетической инфекции, некорректно проведенного забора материала, нарушения транспортировки пробирок. Кроме того, подобные результаты встречаются у пациентов с протекающими аутоиммунными заболеваниями и гепатитами различного типа. Может проводиться Western Blot (иммунный блоттинг), который сочетает в себе ИФА и разделение белков вируса.

Тогда положительный результат будет при наличии гликопротеида вирусной инфекции gp160. Он является предшественником гликопротеинов оболочки ВИЧ gp41 и gp120. Если данные молекулы отсутствуют, заключение лабораторного исследования считается отрицательным. Проведение Western Blot в сочетании с ИФА позволяет получить результаты, достоверность которых превышает 98%. В случае, когда ИФА положительный, а Western Blot отрицательный - тестирование считается сомнительным и требует проведения ПЦР.